一、小龍蝦“五月瘟”病原類型鑒定與PCR快速鑒定方法建立
2021年
1）5月份：病害流行期間進(jìn)行田間調(diào)查和取樣（100尾以上）；
2）6-12月份：實(shí)驗(yàn)室病原鑒定及感染實(shí)驗(yàn)。
2022年
1）1-6月份：感染實(shí)驗(yàn)，鑒定病原可靠性；
2）7-12月份： 如果鑒定得到可靠病原，建立病原PCR快速鑒定和定量方法，后續(xù)用于分子育種
二．小龍蝦抗病標(biāo)記鑒定與F1代群體選育
2021年
1）3-4月份
公司養(yǎng)殖塘放苗前，取同一群的苗種組織樣品（200尾），保留于無水乙醇中。
2）5-6月份
(1)病害流行期間，對(duì)至少三個(gè)養(yǎng)殖塘進(jìn)行調(diào)查取樣；
(2)同一養(yǎng)殖塘中，收集最先顯示“五月瘟”癥狀的瀕臨死亡的蝦300尾以上，后期收集最后活下來且不顯示“五月瘟”癥狀的蝦300尾以上，保留于無水乙醇中；
(3)后期對(duì)其他無癥狀且生長快速活蝦保種（500尾以上；定義為F1代選育群體）；
(4)對(duì)其他2個(gè)以上養(yǎng)殖塘也如上進(jìn)行取樣。
3）6-12月份
實(shí)驗(yàn)室遺傳分析，鑒定抗病標(biāo)記。如獲得關(guān)聯(lián)標(biāo)記，將應(yīng)用于2022年分子育種。
2022年
1）時(shí)間？：F1代（三個(gè)塘來源的1500尾）繁殖F2代；
2）3-4月份
F2苗種分三塘進(jìn)行養(yǎng)殖；取F2苗種組織樣品（200尾），保留于無水乙醇中。
3）5-6月份
(1)病害流行期間，對(duì)至少三個(gè)養(yǎng)殖塘進(jìn)行調(diào)查取樣；
(2)同一養(yǎng)殖塘中，收集最先顯示“五月瘟”癥狀的瀕臨死亡的蝦300尾以上，后期收集最后活下來且不顯示“五月瘟”癥狀的蝦300尾以上，保留于無水乙醇中；
(3)后期對(duì)其他無癥狀且生長快速活蝦保種（500尾以上；定義為F2代選育群體）；
(4)對(duì)其他2個(gè)以上養(yǎng)殖塘也如上進(jìn)行取樣。
4）6-12月份
實(shí)驗(yàn)室遺傳分析，鑒定抗病標(biāo)記。如獲得關(guān)聯(lián)標(biāo)記，將應(yīng)用于2023年分子育種。
三．抗病品系群體或分子輔助選育
2021年
1)1-2月份
收集三個(gè)以上不同來源的快速生長群體，每個(gè)群體雌雄各50尾以上（定義為F0代）；
2)4-9月份
不同地理群體雌雄（選茶色和棕黑色卵巢個(gè)體）各30尾以上進(jìn)行-配組；（如果條件允許，分多池塘進(jìn)行繁殖）。
2022年
1)1-3月份
(1)苗種分6個(gè)池塘養(yǎng)殖（每個(gè)池塘>3000尾，其中三個(gè)池塘作為養(yǎng)殖對(duì)照，另外三個(gè)池塘作為病原實(shí)驗(yàn)塘）;
(2)取200尾苗種無水乙醇保存。
2)5-6月份
(1)對(duì)三個(gè)實(shí)驗(yàn)塘，通過自然或接種感染病原菌，進(jìn)行抗病性狀對(duì)比實(shí)驗(yàn)；
(2)對(duì)同一養(yǎng)殖塘中，收集最先顯示“五月瘟”癥狀的瀕臨死亡的活蝦300尾以上，收集最后活下來且不顯示“五月瘟”癥狀的蝦300尾以上，保留于無水乙醇中。
3)6-7月份
(1)商品蝦階段，對(duì)6個(gè)養(yǎng)殖塘中存活下來的蝦，開展生長性狀的測量（體長、體重等），并進(jìn)行組織取樣（每個(gè)塘300尾以上），用于實(shí)驗(yàn)室遺傳分析；
(2)對(duì)最好的10%無癥狀且生長快速活蝦個(gè)體（每個(gè)塘300尾以上）進(jìn)行熒光標(biāo)記，保種（300尾以上/養(yǎng)殖塘；定義為F2代選育群體）。
4)F2育種群體繁殖F3代。
